波多野结衣 黑人丨亚洲va国产日韩欧美精品色婷婷丨国产爽爽久久影院潘金莲丨国产玉足脚交欧美一区二区丨欧美一区二区在线丨日本免费一区二区三区激情视频丨欧美大片免费观看在线观看网站推荐丨一个本道久久综合久久88丨国产精品美女久久久久久2021丨亚洲中文欧美在线视频丨国产亚洲精品麻豆一区二区丨精品xxxxx丨人妻夜夜爽天天爽一区二区丨在线爽丨97在线成人国产在线视频丨久久22丨久久91丨农村少妇野战做爰全过程丨日韩久久免费丨秋霞无码久久久精品丨久久艹中文字幕丨懂色av一区二区三区免费看丨日本人妻巨大乳挤奶水丨中文字幕日本精品一区二区三区丨国产三级在线观看播放

  siRNA轉(zhuǎn)染試劑說明書

貨號：YJ0871

保存：2-8℃

組分說明

   Catalog no.                YJ0871           YJ0871A

   Kit Size                  0.5 ml             1 ml

siRNA Transfection Reagent         0.5 ml           1 ml

產(chǎn)品簡介

         siRNAFect 是一種的陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑。適用于多種細(xì)胞的 siRNA  轉(zhuǎn)染，其原理為帶正電的脂質(zhì)體通過靜電作用結(jié)合到 RNA  的磷酸骨架上形成轉(zhuǎn)染復(fù)合物，將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加到細(xì)胞上可以與帶負(fù)電的細(xì)胞膜表面結(jié)合即可通過胞吞作用將 siRNA 導(dǎo)入細(xì)胞中。主要應(yīng)用于 RNAi  研究，基因表達(dá)和基因功能研究等。

注意事項(xiàng)

 1.  轉(zhuǎn)染試劑使用前請先震蕩搖勻。

 2.  轉(zhuǎn)染效率與細(xì)胞密度有很大關(guān)系，不同實(shí)驗(yàn)間應(yīng)應(yīng)保持一個(gè)基本的傳代步驟，且應(yīng)確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞沒有長滿或處于靜止期。一般貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染的*細(xì)胞密度是70-90%，懸浮細(xì)胞的*細(xì)胞密度為2-4x106 細(xì)胞/ml，用于轉(zhuǎn)染的*細(xì)胞密度根據(jù)不同的細(xì)胞類型或用途而異。  

使用方法

    以下操作步驟以12孔板為例，其他孔板按照表1中所列用量進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

  1.  在12孔板的每孔中加入1  ml正常生長培養(yǎng)基（根據(jù)需要可加入適量的血清），接種1-3x10  細(xì)胞。在37℃條件下培養(yǎng)細(xì)胞濃度至70-90%。根據(jù)細(xì)胞類型的不同，這一過程通常需要18-24小時(shí)不等。由于轉(zhuǎn)染效率培養(yǎng)條件及其敏感，所以應(yīng)在不同的實(shí)驗(yàn)間建立一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的傳代流程。

  2.  將20 pmol iRNA溶于終體積為50 μl的無血清，無抗生素的培養(yǎng)基中，渦旋5秒或者用槍盡量吹打均勻。

  3.  將2.6  μl轉(zhuǎn)染試劑稀釋到終體積為50 μl的無血清，無抗生素的培養(yǎng)基中，渦旋10秒。

      注意：溶解過程中可能會出現(xiàn)白色混濁，但不影響轉(zhuǎn)染效率。

  4． 將稀釋好的轉(zhuǎn)染試劑加入到核酸溶液中（注意順序一定不能顛倒），渦旋1秒，室溫孵育15分鐘，使轉(zhuǎn)染試劑與核酸形成穩(wěn)定的復(fù)合物（此步驟盡量不要超過20分鐘，否則會影響轉(zhuǎn)染效率）。

  5.  向穩(wěn)定復(fù)合物中加入900  μl帶血清的培養(yǎng)基，用槍輕輕吹打均勻。

  6.  吸去培養(yǎng)板中原有的培養(yǎng)基，加入步驟5中混合好的培養(yǎng)基。在37℃條件下培養(yǎng)細(xì)胞24-72小時(shí)。

  7.  根據(jù)細(xì)胞類型和啟動子活性不同，在轉(zhuǎn)染后24-72小時(shí)分析細(xì)胞抽提物，檢測報(bào)告基因活性。

  8.  對于穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞系，在轉(zhuǎn)染72小時(shí)后，按1：10的比例在細(xì)胞中加入選擇培養(yǎng)基對已轉(zhuǎn)染的報(bào)告基因進(jìn)行篩選。

                                表1：  對不同大小的細(xì)胞培養(yǎng)皿，試劑的用量

培養(yǎng)板   每孔表面積  鋪板培養(yǎng)基體積  siRNA和稀釋終體積（μl）siRNA轉(zhuǎn)染試劑體積

96孔         0.3        100  μl        3 pmol至10  μl     0.4  μl至10 μl

24孔          2         500  μl        10 pmol至20  μl       1.3  μl至20 μl

 12孔          4        1 ml           20 pmol至50  μl      2.6  μl至50 μl

35 mm        10         2 ml          50 pmol至100  μl       6.6  μl至100 μl

 6孔         10         2 ml          50 pmol至100  μl     6.6  μl至100 μl

  60 mm       20        5 ml     100 pmol至200  μl       13.3 μl至200 μl

 10 cm        60        15 ml      300 pmol至500  μl       40 μl至500 μl