波多野结衣 黑人丨亚洲va国产日韩欧美精品色婷婷丨国产爽爽久久影院潘金莲丨国产玉足脚交欧美一区二区丨欧美一区二区在线丨日本免费一区二区三区激情视频丨欧美大片免费观看在线观看网站推荐丨一个本道久久综合久久88丨国产精品美女久久久久久2021丨亚洲中文欧美在线视频丨国产亚洲精品麻豆一区二区丨精品xxxxx丨人妻夜夜爽天天爽一区二区丨在线爽丨97在线成人国产在线视频丨久久22丨久久91丨农村少妇野战做爰全过程丨日韩久久免费丨秋霞无码久久久精品丨久久艹中文字幕丨懂色av一区二区三区免费看丨日本人妻巨大乳挤奶水丨中文字幕日本精品一区二区三区丨国产三级在线观看播放

α-半乳糖苷酶（α-GAL）活性檢測試劑盒說明書

注意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。

貨號：100T/48S

產品內容：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

微量法

試劑一：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入 2.5mL 雙蒸水，充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存。

試劑二：液體 4mL×1 瓶，4℃保存。試劑三：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。

標準液：液體 1mL×1 支，4℃保存，5μmol/mL 對硝基苯酚溶液。

產品說明：

α-GAL (EC 3.2.1.22)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，能專一地催化α半乳糖苷鍵的水解，主要參與棉子糖、水蘇糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。α-GAL

對于植物種子的萌發(fā)至關重要，種子萌發(fā)初期，其催化產生的 D-半乳糖通過糖酵解途徑迅速轉化和消耗，為種子的萌發(fā)提供最初的能量來源，后期則主要參與細胞壁儲藏多糖水解。

α-GAL 分解對-硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷生成對-硝基苯酚，后者在 400nm 有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算α-GAL 活性。

試驗中所需的儀器和試劑：

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、粗酶液提取：

1、細菌或培養(yǎng)細胞的處理：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％，超聲 3 秒，間隔 10 秒，重復30 次），15000g，4℃，離心 20 分鐘，取上清，置冰上待測。

2、組織的處理：稱取約 0.2g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿；15000g，4℃，離心 20 分鐘， 取上清，置冰上待測。

3、標準液的處理：用蒸餾水將標準液稀釋至 200、100、50、25、12.5、6.25、0nmol/mL.

二、測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 400nm，蒸餾水調零。

2、樣本測定，（在 EP 管或 96 孔板中依次加入下列試劑）：

充分混勻， 400nm 處測定吸光值 A，計算ΔA=A 測定-A 對照。每個測定管需設一個對照管。三、α-GAL 活性計算：

根據標準管的吸光度（x，減去濃度為 0 的標準管 OD 值）和濃度（y，nmol/mL）建立標準曲線，將△A 帶入標準曲線中，計算樣品生成的產物量（nmol/mL）。

1.按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每小時產生 1nmol  對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

α-GAL 活力(nmol/h /mg prot)=(y×V 反總)÷(V 樣×Cpr)÷T=14×y÷Cpr 需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質含量測定試劑盒。

2.按樣本鮮重計算：

單位的定義：每 g  組織每小時產生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

α-GAL 活力(nmol/h /g 鮮重)＝(y×V 反總)÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T=14×y ÷W

3.按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每 1  萬個細菌或細胞每小時產生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

α-GAL 活力(nmol/h /104 cell)= (y×V 反總)÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.028×y

Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；V 反總：反應體系總體積，0.07mL；V 樣：加入反應體系中樣本體積，0.01mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣本質量，g； 500：細胞或細菌總數， 500 萬；T：反應時間，0.5h。

從2011年開始我們致力于在生命科學領域、生物醫(yī)學實驗外包及論文潤色服務，協助客戶各類實驗服務及論文潤色十余年，是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究，歡迎您與我們聯系。

實驗代做服務：